HPLC同时测定复方芩兰口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量

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HPLC同时测定复方芩兰口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量

刘耕文 刘超

黑龙江珍宝岛药业股份有限公司,黑龙江 虎林 158400

摘要:目的:建立HPLC测定法同时测定复方芩兰口服液口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry C18色谱柱( 150mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-0.05%磷酸为流动相;流速1.0mL.min-1;检测波长275nm,柱温30℃。结果:0.1~0.8mg.mL-1黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9967)、1~10μg.mL-1汉黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9994);黄芩苷平均加样回收率99.31%(RSD=0.44%),汉黄芩苷平均加样回收率95.32%(RSD=1.20%)。结论:该方法简便、准确,可同时测定复方芩兰口服液中的黄芩苷、汉黄芩苷的含量,可作为复方芩兰口服液提升质量标准的参考依据。

关键词: 复方芩兰口服液;黄芩苷;汉黄芩苷;高效液相色谱法;含量测定;质量控制

 

复方芩兰口服液是由金银花、连翘、黄芩、板蓝根4味中药组成,具有辛凉解表、清热解毒之功效,用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛[1]。具有抗菌、抗病毒、抗炎活性的有效成分主要是黄芩中的黄芩苷、汉黄芩苷[2-5]。现行质量标准中仅对处方中主要药味黄芩仅检测黄芩苷含量,未检测汉黄芩苷含量[6-8],可为该制剂的质量控制及标准修订提供参考。

1.仪器与试药

赛默飞U3000型高效液相色谱仪、Waters Symmetry C18色谱柱。黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110715-201821);汉黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号:112002-201501);复方芩兰口服液(黑龙江珍宝岛制药股份有限公司,批号:S200628-3~-5);磷酸(国药集团化学试剂有限公司);甲醇为色谱纯(欧姆尼);乙腈为色谱纯(欧姆尼);水为超纯水;其余试剂为分析纯。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相乙腈-0.05%磷酸(30∶70),流速1.0mL·min-1,检测波长275nm[ 4],进样量10μL,柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备

称取汉黄芩苷对照品约2.5mg,精密称定,置于200mL的量瓶中,加甲醇至刻度,作为汉黄芩苷对照品储备液,称取黄芩苷对照品约10mg,精密称定,置于10mL的量瓶中,加汉黄芩苷对照品储备液至刻度,作为混合对照品储备液,精密量取混合对照品储备液2mL,置于5mL的量瓶中,加甲醇至刻度,作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品1mL,置于50mL的量瓶中,加甲醇至刻度,作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2项下”对照品储备液1、2、4、6、8mL分别置于10ml的量瓶中,加甲醇稀释至刻度,黄芩苷、汉黄芩苷浓度分为为0.1~0.8mg·mL-1,1.25~10.0μg·mL-1,精密吸取10μL,按上述色谱条件,分别进样测定。以峰面积对应的质量浓度进行回归分析得:黄芩苷的质量浓度在0.1~0.8mg·mL-1内峰面积与质量浓度线性关系良好,回归方程Y=780.23X-46.096,r=0.9992;汉黄芩苷的质量浓度在1.25~10.0μg·mL-1内峰面积与质量浓度线性关系良好,回归方程Y=683.18X+0.0479,r=0.9994。

2.5 精密度试验

取2.2项下混合对照品溶液,按“2.1项下”色谱条件进样6次,分别记录黄芩苷、汉黄芩苷峰面积,计算RSD分别为0.03%、0.06%,表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批次的复方芩兰口服液(3批)6份,按“2.1项下”色谱条件进样6次,计算黄芩苷、汉黄芩苷峰面积的RSD分别为0.44%、0.42%,均小于2%,表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液,按2.1项下色谱条件操作,分别于0h、2h、4h、8h、12h和24h进样分析,计算黄芩苷、汉黄芩苷峰面积的RSD分别为0.64%、1.46%,均小于2%,表明供试品溶液在24h内相对稳定。

2.8 加样回收率试验

精密量取已知含量的复方芩兰口服液1mL,加入混合对照品溶液适量,按2.3项制成加标供试品溶液,按“2.1项下”色谱条件测定,计算回收率。黄芩苷、汉黄芩苷平均回收率分别为99.31%、95.32%,计算RSD分别为0.44%、1.20%,表明该方法测定结果准确可靠。

2.9 耐用性试验

检测波长分别调整为277nm和273nm、流速分别调整为0.8mL·min-1和1.2mL·min

-1、柱温由30℃分别调整为25℃和35℃、流动相比例分别调整为乙腈-0.05%磷酸溶液(32:68)和乙腈-0.05%磷酸溶液(28:72),测定供试品中黄芩苷、汉黄芩苷含量,与“2.1项下”色谱条件测定结果进行统计分析,黄芩苷、汉黄芩苷含量RSD%分别为1.52%、1.87%,均小于2.0,表明该方法耐用性良好。

3.讨论

黄芩苷、汉黄芩苷分别于275、273nm波长处获得最大吸收峰,275nm处对黄芩素、黄芩苷峰面积未显示明显影响,本次实验将测定波长确定为275nm[9]。结果表明:方法简便、准确,可作为复方芩兰口服液提升质量标准的参考依据。

 

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典,2015年版.(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015.6

[2]张峰.黄芩中黄酮类化合物药理学作用分析[J].世界最新医学信息文摘,2017,17(84):106+130.

[3]于莉莉.黄芩苷药理作用的探讨[J].中国农村卫生,2014(06):56-57.

[4]王艳春,张忠艳,姜小卓.中药黄芩的药理及应用[J].中外医疗,2009,28(13):158.

[5]刘正兵.中药黄芩的药理及其应用研究[J].求医问药(下半月),2012,10(12):337.

[6]薛萍,沈晓燕,杨敏智.高效液相色谱法同时测定复方芩兰口服液中绿原酸等5种成分的含量[J].中国药品标准,2018,19(02):151-157.

[7]叶建晨.高效液相色谱法同时测定复方芩兰口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量[J].海峡药学,2012,24(11):74-76.

[8]张成志.高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药,2008(04):939-941.

[9]刘青青,王玉波,刘建伟,徐倩倩,张冉冉,王怡晴.同时测定黄芩提取液中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素含量的高效液相色谱方法的建立[J].滨州医学院学报,2020,43(01):54-57.

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